渐渐习惯了现代生活的美国队长美国队长史蒂夫·罗杰斯（克里斯·埃文斯 Chris Evans 饰），在一次行动后隐隐嗅到神盾局内部所弥漫出来的美国队长凶险气味。而当得知神盾局正秘密进行的美国队长最新泛目录站群程序“洞察计划”后，他更为此感到愤怒。美国队长某天，美国队长神盾局指挥官尼克-法瑞（塞缪尔·杰克逊 Samuel L. Jackson 饰）遭到一群武装分子袭击，美国队长他拼尽全力将一支U盘交到美国队长手中，美国队长这里面藏着该局二战以来最重要且最可怕的美国队长秘密。在此之后，美国队长最新泛目录站群程序美国队长因涉嫌杀害尼克而遭到前局长亚历山大·皮尔斯（罗伯特·雷德福/Robert Redford 饰）的美国队长通缉和追杀，逃亡中他得到黑寡妇（斯嘉丽·约翰逊 Scarlett Johansson 饰）和退伍老兵“猎鹰”（安东尼·麦凯 Anthony Mackie 饰）的美国队长帮助。　　他们必须争分夺秒解开神盾局的美国队长秘密，阻止“洞察计划”的美国队长施行……